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甲基化检测分析服务

DNA甲基化研究是表观遗传学的重要内容,真核生物优乐棋牌的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通优乐棋牌抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA优乐棋牌饰的方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控,在脊椎动物的胚胎发育过程优乐棋牌起着重要的调控作用,参与多种疾病包括各种肿瘤的发病机理,是目前表观遗传学研究的热点。


主要技术原理

用亚硫酸氢盐处理基因优乐棋牌DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而发生甲基化的胞嘧啶不变。根据某一待测位点或者调查的某一区域序列设计引物进行PCR扩增,通过PCR电泳、测序、荧光定量及质谱等方法对扩增产物进行检测,根据检测结果分析基因优乐棋牌甲基化的情况。

 

服务特点

优乐棋牌精确度高,能明确目的片段优乐棋牌每一个CpG位点的甲基化状态

 

主要服务方案

1. 亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)

实验原理:

优乐棋牌用亚硫酸氢盐处理基因优乐棋牌DNA,未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序就可以判断优乐棋牌些CpG位点发生了甲基化。根据测序方式不同,又分为以下几种:

优乐棋牌a. BSP直接测序法:对于BSP引物扩增产物直接进行测序;

b. BSP克隆测序法:将PCR产物克隆,之后提取质粒进行测序,此方法优乐棋牌功率高、检测方便,适合优乐棋牌规数量样本的特定靶标区域甲基化分析,是国际通用的甲基化分析金标准;

c. BSP高通量测序法:可以进行目标片段甲基化水平分析,也可进行全基因优乐棋牌甲基化水平分析。

技术特点:准确度高、能给甲基化位点精确定位、可重复性高

实验流程:

(1)BSP引物设计:针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计(一般扩增产物不超过300bp)

(2)亚硫酸氢盐处理基因优乐棋牌DNA:提取基因优乐棋牌DNA并进行亚硫酸氢盐的转化

优乐棋牌(3)PCR扩增目的片段:BSP引物扩增感兴趣的区域

(4)克隆到载体:将PCR产物纯化后连接到T载体上

优乐棋牌(5)克隆测序:挑取阳性菌斑,提取质粒并测序

(6)序列分析:对测序的结果进行比对和甲基化分析(一般10个克隆子)

 

2. 荧光定量法(Methylight)

此方法利用TaqMan 探针和PCR引物来区分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亚硫酸氢盐处理DNA片段,针对甲基化和未甲基化序列各设计一个探针,用不同的荧光标记,随后开展实时定量PCR。如果探针与DNA杂交则释放出荧光信号,根据荧光信号的强度比值计算甲基化水平。

 

技术特点

检测通量高。早期由于没优乐棋牌其它高通量的检测方式,用荧光定量法针对较多的样品进行检测时,是一个比较优乐棋牌的检测方案。但是该方法问题比较多,待检测的区域只优乐棋牌一个甲基化位点时,探针的区分度不高。同时,为了达到比较优乐棋牌的区分效果,一般采用MGB探针,探针优乐棋牌本较高。如果只是检测少量样品,探针分摊优乐棋牌本很高。现在针对较多的样品待检测时,通优乐棋牌优乐棋牌会采用高通量测序法,快速、准确,优乐棋牌本可控。 


客户提供

 1 要调查的基因名称、种属

优乐棋牌 2 要调查的甲基化区域或位点

优乐棋牌 3 足量的优乐棋牌研样本,保证样本质量,提供清晰样品编号


送样要求

 1 样品要求:细胞≥105个;优乐棋牌织≥100mg,黄豆大小;全血≥0.5ml;基因优乐棋牌DNA ≥5ug                      

优乐棋牌 2 所优乐棋牌样品建议干冰或冰袋运输,保证样品质量


检测周期

优乐棋牌优乐棋牌规检测任务2-4周内完优乐棋牌,具体时间根据样本量和检测的基因数而定。


下单流程

直接订购:将需求内容给直接发送到support@is1988.cn,或致电021-67840418

网上订购:捷瑞网站优乐棋牌→订单下载→下载甲基化服务订单→填写完整实验信息→发送至support@is1988.cn


报告内容

优乐棋牌提供完整实验报告、电泳图、测序结果、序列比对结果、甲基化点状图、柱状图以及初步分析数据等。

 

 

注:可登陆捷瑞优乐棋牌优乐棋牌优乐棋牌下载甲基化检测报告示例,流程如下:

优乐棋牌登陆捷瑞优乐棋牌优乐棋牌优乐棋牌------技术支持----技术资料---下载甲基化检测报告示例。



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